Джон Йохан Чо е роден в Сеул, Южна Корея на 16 юни 1972 год., но се премества в Лос Анджелис, Калифорния още като дете, заради работата на баща си. Чо учи в Herbert Hoover High School в Глендейл, а после се премества в the University of California в Бъркли, със специалност английска литература. След дипломирането си, Чо се завръща в Л. А., за да работи като учител в Pacific Hills School. Започва и да се снима за известната азиатско-американска компания East West Players.
Чо се появява в малки роли и камерни проекти като „Wag the Dog“ (1997) и „Bowfinger“ (1999). Звездният му момент идва, когато взема участие в тийн романтичната комедия „American Pie“ (1999). Веднага последват други ангажименти като „Harold & Kumar Go to White Castle“ (2004). Също така участва в много успешния франчайз „Star Trek“ (2009), в ролята на Хикару Сулу.Заедно с актьорската кариера, Чо развива и музикална – той е вокалист на групата „Viva La Union“.
Женен е за актрисата Кери Хигучи, с която имат две деца.